Відповідно до статті 18 Закону України "Про донорство крові та її компонентів" та постанови Кабінету Міністрів України від 15.01.96 N 73 "Про затвердження Положення про контроль за відповідністю імунобіологічних препаратів, що застосовуються в медичній практиці, вимогам державних та міжнародних стандартів" (із змінами), з метою приведення у відповідність до вимог державних та міжнародних стандартів показників якості препаратів крові, що виробляються в Україні

1. Затвердити та ввести в дію з 01.09.2005 року настанови з якості медичних імунобіологічних препаратів:

1.1. "Керівництво по складанню аналітично-нормативної документації на полібіолін (Polybiolinum)" (додається);

1.2. "Керівництво по складанню аналітично-нормативної документації на тромбін (Thrombinum)" (додається).

2. Встановити, що заклади переливання крові України, які знаходяться у сфері управління Міністерства охорони здоров'я України, керуються затвердженими в пункті 1 документами при складанні аналітично-нормативних документацій на перелічені препарати при їх реєстрації. Іншим суб'єктам господарювання рекомендується керуватись затвердженими в пункті 1 документами при складанні аналітично-нормативних документацій на перелічені препарати при їх реєстрації.

3. Державній службі лікарських засобів і виробів медичного призначення Міністерства охорони здоров'я України у тримісячний термін забезпечити опублікування цього наказу в засобах масової інформації.

4. Контроль за виконанням наказу покласти на заступника Міністра Рибчука В.О.

1. Сфера застосування та основні вимоги

2. Специфікація

3. Методи контролю

3.1. Опис

3.2. Час розчиннення

3.3. Автентичність

3.4. Каламутність

3.5. Кольоровість

3.6. Механічні включення

3.7. рН

3.8. Кількісне визначення білку

3.9. Електрофоретичний склад білків

3.10. Втрата в масі при висушуванні

3.11. Стерильність

3.12. Пірогени

3.13. Аномальна токсичність

1. Сфера застосування та основні вимоги.

Це керівництво по складанню аналітично-нормативної документації поширюється на медичний імунобіологічний препарат Полібіолін, що містить білки донорської плазми: 25% альбуміну та 75% альфа-, бета-глобулінів.

Препарат отримують з плазми крові людини, яка відповідає вимогам нормативного документу "Плазма людини для фракціонування" шляхом фракціонування спиртово-водними осаджувачами при температурі нижче 0 град. С.

При виготовленні препарату виробничі пули плазми повинні перевірятися методом полімеразної ланцюгової реакції на вміст нуклеїнових кислот вірусу гепатиту С, вірусу гепатиту В, парвовірусу В-19, ВІЛ 1 та 2.

Розчин полібіоліну пропускають через фільтри з діаметром пор не більше 0,22 мкм, який затримує бактерії та розливають у асептичних умовах.

Полібіолін інактивується проти вірусів гепатиту пастеризацією білкового розчину при 60 +- 0,5 град. С на протязі 10 годин перед його ліофільним висушуванням.

Препарат не містить консервантів та антибіотиків, випускається в ліофілізованому вигляді.

Полібіолін призначений для внутрішньом'язевого введення.

Біостимулюючий препарат з вираженою протизапальною дією.

2. Специфікація

3. Методи контролю

3.1. Опис. Порошок білого кольору з легким жовтим відтінком, без запаху, гігроскопічний.

3.2. Розчинність. Вміст контейнеру розчиняють в 5 мл води Р, в ізотонічному 0,9% розчині натрію хлориду Р та 0,25-05% розчині новокаїну. Час розчинення повинен бути не більше 10 хв.

3.3. Автентичність (ідентифікація):

У препараті повинні виявлятися білки, властиві тільки плазмі або сироватці крові людини, і відсутні білки тваринного походження. Визначення проводять методом імуноелектрофорезу.

0,5 г препапарату розводять в 5 мл 0,9% розчину натрію хлориду Р. По 2 мкл препарату поміщають в лунки пластинки з агаровим гелем. Паралельно в одну з лунок поміщають 2 мкл плазми людини.

В електродні камери апарату для електрофорезу наливають барбіталовий буферний розчин рН 8.2 і поміщають пластинки з агаровим гелем. На обидва кінці пластинок поміщають смужки хроматографічного або фільтрувального паперу, розміром 120 x 60 мм, складених у 6 шарів, які з'єднують з електродними камерами. Електрофорез проводять при силі струму 10 мА, напрузі 100 В протягом 1.5 годин.

Після проведення електрофорезу між лунками в агаровому гелі вирізають траншеї (10 x 2 мм), в кожну з них вносять 60 мкл видоспецифічної антисироватки, яка преципітує сироваткові білки людини (ІмБіо, Росія, або аналогічної якості) та сироватки биків, коней (Імтек, Росія або аналогічної якості). Пластинку поміщають в камеру, в яку ставлять бюкс з 100 мл води Р (для зволоження) і декількома кристалами фенолу Р (консервант). Через 24 години пластинку виймають з камери, занурюють в кювету з 250 мл 0.9% розчину натрію хлориду Р, що містить декілька кристалів фенолу Р, і відмивають протягом 2 діб від білку, який не прийняв участі в утворенні преципітату. Розчин замінюють 4 рази на добу.

Відмиту пластинку висушують на повітрі протягом 1 години, занурюють у розчин фарбника амідочорного 10 В на 2 години. Потім пластинку виймають, дають змогу стекти фарбнику і занурюють в 2% розчин кислоти оцтової Р на 2 доби для відмивання від надлишку розчину фарбника. 2% розчин кислоти оцтової Р замінюють 4 рази на добу.

Оцінюють локалізацію і число ліній преципітації препарату відносно ліній преципітації сироватки крові людини, яка повинна проявляти не менше 15 ліній преципітації зі своєю антисироваткою. Між лунками з препаратом і антисироватками до сироваток крові тварин лінії преципітації повинні бути відсутні.

Примітки:

1. Приготування 1.25% агарового гелю. 12.5 г агару (очищеного) поміщають в хімічний стакан місткістю 1 л, додають 500 мл води Р і залишають для набухання гелю протягом 1 годин при температурі від 18 до 20 град. С. Стакан поміщають на водяну баню, що кипить, і витримують до повного розчинення агару. Об'єм розчину гелю доводять водою Р до 500 мл, додають 500 мл барбіталового буферного розчину рН 8.2, перемішують, фільтрують через марлю медичну, складену в 3 шари, додають мертіолят до концентрації 100 мкг/мл і розливають у флакони по 50 мл. Перед використанням агаровий гель розплавляють на водяній бані.

Термін придатності гелю 2 доби.

2. Приготування барбіталового буферного розчину рН 8.2. 47.6 г барбітал-натрію (медінал; 5.5-диетилбарбітурат натрію) поміщають у колбу місткістю 5 л, додають 69 мл 1 М розчину хлористоводневої кислоти Р, 4.3 л води Р та перемішують до розчинення солей. рН розчину визначають потенціометрично (ДФУ, 1 вид. р. 2.2.3) і при необхідності коригують 1 М розчином хлористоводневої кислоти Р. Термін придатності розчину 3 місяці.

3. Приготування пластинок з агаровим гелем. На скляні пластинки розміром 120 x 90 мм наносять піпеткою 10 мл розплавленого на водяній бані при температурі від 60 до 80 град. С 1.25% агарового гелю і розтирають шпателем до отримання тонкого шару, щоб агаровий гель краще липнув до скла.

Пластинку висушують при температурі від 75 до 80 град. С протягом 5 хвилин.

Потім пластинку поміщають на горизонтальну поверхню і обережно, уникаючи утворення пухирців повітря, наливають 30 мл розплавленого при температурі від 60 до 80 град. С 1.25% агарового гелю до отримання шару товщиною 2-3 мм. Після застигання агарового гелю вирізають 7 лунок діаметром 2-3 мм, використовуючи для цього штамп.

Пластинки використовують протягом 1 доби.

4. Приготування розчину фарбника амідочорного 10 Б. 1.0 г амідочорного 10 Б (Мерк 2005-2007, К N 101167 або аналогічної якості) поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, розчиняють в 450 мл 0,1 М розчину оцтової кислоти Р, доводять об'єм розчину 0.1 М розчином натрію ацетату Р до мітки і перемішують.

Термін зберігання розчину 3 місяці.

5. Приготування 2% розчину кислоти оцтової Р. 300 мл води Р поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, додають 20 мл оцтової кислоти льодяної Р, доводять об'єм розчину водою Р до мітки і перемішують.

Термін зберігання розчину 3 місяці.

6. Приготування 0.9% розчину натрію хлориду Р. 9.0 г натрію хлориду Р поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, розчиняють в 500 мл води Р, доводять об'єм розчину водою Р до мітки, перемішують.

Термін зберігання розчину 7 діб.

7. Приготування 0,1 М розчину натрію ацетату Р.

9,8 г натрію ацетату Р поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, розчиняють в 500 мл води Р, доводять об'єм розчину водою Р до мітки, перемішують.

Термін зберігання розчину 7 діб.

8. Приготування 0,1 М розчину оцтової кислоти Р. 6 г оцтової кислоти льодяної поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, розчиняють в 500 мл води Р, доводять об'єм розчину водою Р до мітки, перемішують.

Термін зберігання розчину 7 діб.

3.4. Каламутність. 0,5 г препарату розчиняють в 5 мл 0,9% розчину натрію хлориду Р. Отриманий розчин Розчин повинен бути прозорим або за ступенем каламутності не перевищувати еталон каламутності IV. (ДФУ, 1 вид р. 2.2.1).

3.5. Кольоровість. Забарвлення розчину препарату, приготовленого для випробування на прозорість, повинне бути не інтенсивніше еталону Y . (ДФУ, І вид. р. 2.2.2).

3.6. Механічні включення. Препарат має відповідати вимогам, зазначеним в Інструкції з контролю лікарських засобів для парентерального застосування на механічні включення (РД 42У-001-93).

3.7. рН. Від 6,6 до 7.2.

Готують розведення 0,5 г препарату в 25 мл 0,9% розчином натрію хлориду Р. Визначення проводять потенціометрично, ДФУ, 1 вип, р. 2.2.3.

3.8. Кількісне визначення білку.

Вміст кожного з трьох флаконів розчиняють в 5 мл води Р. 5.0 мл отриманого розчину поміщають в пробірку місткістю 20 мл, додають 5.0 мл біуретового реактиву Р і перемішують.

Через 30 хвилин вимірюють оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 540 нм в кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи в якості компенсаційного розчину розчин, що містить 5.0 мл 0.9% розчину натрію хлориду Р і 5.0 мл біуретового реактиву Р.

Паралельно аналогічно розчину, що випробовується, в тих же умовах вимірюють оптичну густину розчину, що містить 5.0 мл розчину порівняння і 5.0 мл біуретового реактиву Р, використовуючи в якості компенсаційного розчину розчин, що містить 5.0 мл 0.9% розчину натрію хлориду Р і 5.0 мл біуретового реактиву.

Вміст білку (X) в 1 мл препарату, в грамах, розраховують за формулою:

Примітка. Приготування розчину порівняння. 1.0 мл ФСЗ ДФУ розчин альбуміну людини 10 % поміщають в мірну колбу місткістю 50 мл, доводять об'єм розчину 0.9% розчином натрію хлориду Р до мітки і перемішують.

Термін придатності розчину 2 доби при температурі від 4 до 8 град. С.

Вміст білку повинен становити 8-10%