Відповідно до статті 40 Закону України "Про забезпечення санітарного та епідемічного благополуччя населення", з метою науково-методичного забезпечення державного санітарно-епідеміологічного нагляду

1. Затвердити Методику визначення бактерицидності рідких природних лікувальних ресурсів та преформованих засобів, що додається.

2. Департаменту організації санітарно-епідеміологічного нагляду Методику визначення бактерицидності рідких природних лікувальних ресурсів та преформованих засобів довести до відома керівників установ і закладів державної санітарно-епідеміологічної служби, інших заінтересованих установ та закладів Міністерства охорони здоров'я України в установленому порядку.

Контроль за виконанням наказу залишаю за собою.

Цей документ встановлює методику виконання вимірювань показника бактерицидності рідких природних лікувальних ресурсів та преформованих засобів в діапазоні від 2,5%до 60%.

Оцінка якості природних лікувальних ресурсів (далі - ПЛР) та преформованих засобів необхідна для їх ефективного використання у санаторно-курортній та позакурортній практиці в натуральному вигляді і після промислового фасування.

Бактерицидна і бактериостатична дія ПЛР та преформованих засобів може обумовлюватись як автохтонною мікробіотою чи мікробіотою субстрату, так і специфічним комплексом органічних речовин: бітуми, феноли, гумінові і нафтенові та фульвокислоти тощо. Виразність антибактеріальної активності залежить від кількісного і якісного вмісту автохтонної мікробіоти і продуктів її життєдіяльності. Необхідність визначення антимікробної дії ПЛР та преформованих засобів продиктована також й тим, що застосування засобів з бактерицидним ефектом статистично вірогідно знижує число осіб з захворюваннями нирок та сечовивідних шляхів.

Дана методика удосконалює спосіб визначення бактерицидності рідких ПЛР та преформованих засобів шляхом розробки якісно-кількісної оцінки на визначений фіксований день проведеного дослідження, що дає можливість значно скоротити термін дослідження, працевитрати та витрачання електроенергії й інших матеріальних ресурсів.

Природні лікувальні ресурси (ПЛР) - до природних лікувальних ресурсів належать мінеральні і термальні води, лікувальні грязі та озокерит, ропа лиманів та озер, морська вода, природні об'єкти і комплекси із сприятливими для лікування кліматичними умовами, придатні для використання з метою лікування, медичної реабілітації та профілактики захворювань.

Преформовані засоби - препарати на основі природних лікувальних ресурсів: води з харчовими та рослинними добавками, грязьові розчини, різнорозчинникові грязьові витяжки, грязьові маси з добавками неорганічних, органічних сполук та біологічно активних компонентів, які спричинюють лікувальну чи профілактичну дію на організм людини при внутрішньому або зовнішньому застосуванні.

Автохтонна мікробіота - сукупність мікроорганізмів, які постійно живуть і розмножуються у воді.

3.1. Норми похибки вимірювань і нормативи контролю

3.1.1. Похибка вимірювань не регламентується.

3.1.2. МВ 10.2.1-113-2005 "Санітарно-мікробіологічний контроль якості питної води". Затверджено наказом МОЗ від 3.02.2005 N 60;

Положение о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения. Затверджено заступником Міністра охорони здоров'я СРСР, Головним державним санітарним лікарем СРСР від 18.05.79 р.;

ДСП 9.9.5.-064-2000 "Порядок видачі дозволів на роботу із мікроорганізмами I-IV груп патогенності та рекомбінантними молекулами ДНК". Затверджено постановою головного державного санітарного лікаря України від 20.12.2001 N 64;

ЕА-04/10 Акредитація для мікробіологічних лабораторій (доповнення до ДСТУ ISO/IEC 17025-2001 Загальні вимоги до компетентності випробувальних та калібрувальних лабораторій - Київ, Держстандарт України, 2007).

3.2. Засоби вимірювальної техніки

Ваги лабораторні загального призначення 4-го класу точності, ГОСТ 24104-88.

pH-метр з похибкою вимірювання +- 0,01 од. PH.

Термостат, який забезпечує температуру 37 град. C +- 0,5 град. C.

3.3. Допоміжне обладнання

Дистилятор, що забезпечує якість дистильованої води згідно з ГОСТ 6709-72.

Стерилізатор паровий (Робочий тиск 2,2 +- 0,2 кгс/кв.см), ГОСТ 5632-72.

Холодильники лабораторні або побутові, ISO 9001.

3.4. Дрібне обладнання і витратні матеріали

Піпетки місткістю 1, 2, 5, 10 куб.см, ГОСТ 20292.

Колба місткістю 1000 куб.см, ГОСТ 1770.

Пробірки бактеріологічні, ГОСТ 25336.

Стакани лабораторні, ГОСТ 25336.

Циліндри мірні, ГОСТ 1770.

Скельця предметні для мікроскопії, ГОСТ 9284-75.

Штативи для пробірок.

Фломастери по склу.

Стандарт каламутності 5 од.

Лупа вимірювальна 4-10 х.

Плитки електричні з закритою спіраллю, ГОСТ 30320-95.

Пінцети медичні, ГОСТ 21241.

Кювета для фарбування бакпрепаратів.

Пальники спиртові, ГОСТ 25336.

Бактеріологічні петлі.

Пробки ватно-марлеві.

Годинники піщані на 1-2 хвилини, ГОСТ 10576-63 або таймер.

Вата гігроскопічна медична, ГОСТ 5556-81.

Марля медична, ТУ У 24.4-31858432-001-2004.

Олія імерсійна для мікроскопії, ГОСТ 13739.

3.5. Реактиви, матеріали

Тест-культура кишкової палички Escherichia coli O55K59 (отримана з фіційного джерела).

Лактоза, ГОСТ 6038-74.

Поживний агар промислового виробництва.

Спирт етиловий, ректифікат 96%, ГОСТ 5962-67.

Натрій хлористий, ГОСТ 4233-77.

Пептон сухий ферментативний для бактеріологічних досліджень, ГОСТ 13805-76.

Бромтимоловий синій.

ОКСИтест-індивідуальний тест для визначення бактеріальної оксидази, ISO 1223.

Набір реактивів для фарбування за Грамом, ТУ У 24.4-24607793-018-2003.

Допускається застосування інших засобів вимірювальної техніки, обладнання, допоміжних пристроїв, реактивів і матеріалів з метрологічними характеристиками і показниками якості не нижче за наведені.

Всі засоби вимірювальної техніки мають бути повірені або атестовані у встановленому порядку.

3.7. Вибірковість методу

Мікробіологічне визначення бактерицидності є вибірковим у присутності інших речовин або компонентів досліджуваних бальнеологічних засобів.

При виконанні досліджень бактерицидності дотримуються вимог безпеки відповідно до ДСП 9.9.5.-80-2002 "Правила влаштування і безпеки роботи в лабораторіях (відділах, відділеннях) мікробіологічного профілю", затвердженими постановою Головного державного санітарного лікаря України від 28.01.2002 N 1) ; чинних інструкцій з охорони праці та інструкцій щодо пожежної безпеки для працівників лабораторії, які застосовують дану методику виконання вимірювань, а також вимог експлуатаційної документації на засоби вимірювальної техніки та обладнання.

До дослідження бактерицидності і обробки отриманих результатів допускаються особи, що мають вищу освіту, пройшли навчання з мікробіологічних методів досліджень, мають досвід роботи в даній галузі не менше 1 року і ознайомлені з методиками відбору проб ПЛР, преформованих засобів та даною методикою.

При проведенні вимірювань слід дотримуватись таких умов:

7.1. Приготування поживних середовищ та підготовка матеріалів

7.1.1. Приготування посуду і матеріалів за вимогами МВ 10.2.1-113-2005.

7.1.2. Приготування поживного агару промислового виробництва здійснюють з сухого комерційного препарату за способом, вказаним на етикетці. Середовище зберігають у холодильнику при (6 +- 2) град. C на протязі 7 діб, або при кімнатній температурі не більше 2 діб.

7.1.3. Приготування стерильного 0,9%-ного фізіологічного розчину.

9 г NaCl розчиняють у 1 куб.дм дистильованої води, розливають у пробірки по 10 куб.см або у флакони по 100 куб.см або більше, закривають пробками і стерилізують в автоклаві при (121 +- 1) град. C (1,1 кгс/кв.см) протягом 20 хв. Термін зберігання не більше двох тижнів.

7.1.4. Напіврідке середовище з лактозою (ЛПС). При відсутності препарату промислового виготовлення середовище готують за наступним прописом: в 1 куб.дм дистильованої води розчиняють 10 г пептону, 5 г NaCl, 4-5 г агар-агару, доводять до кипіння, встановлюють pH (7,2-7,4) од.pH, додають 1 куб.см 1,6%-го спиртового розчину бромтимолового синього. Стерилізують при (121 +- 1) град. C протягом 20 хвилин. У розплавлене середовище вносять 5 г лактози, нагрівають до кипіння, розливають у стерильні пробірки по 3-5 куб.см і стерилізують при (112 +- 1) град. C 12 хвилин.

7.2. Підготовка проб

Відбір проб ПЛР та преформованих засобів здійснюють відповідно ГОСТ 23268.0-91, ДСТУ ISO 5667-3-2001 та MP "Методичні рекомендації по відбору, консервуванню, транспортуванню та зберіганню проб мінеральної води". - Одеса. - 1996.

У якості контролю використовують стерилізовану в автоклаві при 120 град. C протягом 30 хвилин пробу ПЛР або преформованого засобу.